何谓药典方法 | 极客学术

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摘要：所谓药典方法，顾名思义，药典专论所收载的方法，但是否每个人都知道，药典方法考虑到各个实验室的差异，有一定的可调范围。下面我们具体的来探讨一下这个问题吧!

一、中国药典2015规定

0512高效液相色谱法规定如下：品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适用性试验的要求。调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例 X 小于33%时，允许改变范围为0.7X 〜1.3X ; 当X大于33%时，允许改变范围为X —10%〜X+ 10%。

由上文可知，中国药典专论方法除填充剂种类、流动相组分（比例调整在规定范围内）、检测器类型不得改变外，其他条件改变了，还是认为是药典方法。但中国药典没有规定方法确认之说，所以，即使是中国药典方法，也是应该按分析方法验证的相关规定进行全套的方法验证。

二、美国药典41规定

USP41 <621> CHROMATOGRAPHY 规定如下：

为符合系统适用性的要求而调整的操作条件是允许的，除非专论项下另有规定，下面为所列的最大的可调范围，这些调整需要额外的确认数据。为确认新条件对方法的适用性，评估调整对相关分析性能特征存在的潜在影响。多条件的调整，将对系统性能产生累积影响，实施前需仔细考虑。

1、pH of mobile phase(HPLC): 流动性缓冲液的pH:±0.2 units，适用梯度及等度。

2、Concentration of salts in buffer (HPLC): ±10%（pH允许情况下），适用梯度及等度。

3、Ratio of componentsin mobile phase (HPLC):

流动相中组分（≤50%）可以在此比例上再调节±30%，且任一组分比例的调节不应超过±10%（相对于总的流动相），含三组分的流动相的调节可以分组分进行，含双组分的流动相的调节可在最小的组分进行，双组份和三组分的调节实例如下：

双组分：例如流动相50:50，其中一组分50%的30%是15%，但是它超过了占总体比例±10%的规定，所以这个流动相比例的调节范围应以±10%为限，可以在不超过40:60~60:40的范围之间调节。再例如流动相比例为2:98，其中小组分2%的30%是0.6%，这个值不超过占总体比例±10%的规定，此流动相的比例可以在不超过1.4:98.6~2.6:97.4的范围之间调节。

三组分：例如流动相60:35:5，它的次组分35%的30%是10.5%，但是它超过了占总体比例±10%的规定，所以这个流动相比例中的次组分的调节范围应以±10%为限。对于最小组分5%的30%是1.5%。可以在不超过50:45:5~70:25:5或58.5:35:6.5~61.5:35:3.5的范围之间调节。

4、Wavelength ofUV-visible detector (HPLC): 专论中规定的检测波长不允许改变，检测器供应商的程序或另一个验证程序来说明，波长检测误差，最多不得超过±3nm。

5、Stationary phase

Column length (GC): 可以在±70%范围内调节。

Column length (HPLC): 见粒径项下。

Column inner diameter (HPLC): 如果线速度保持恒定，可以调整。见HPLC流速。

Column inner diameter (GC): 最大可调整至±50%。

Film thickness (capillaryGC): 最大可在−50% to100%调整。

6、Particle size(HPLC): 等度洗脱：粒度和柱长均可以修改，但柱长与粒度的比值（L/dp）恒定或在规定柱长与粒度的比值的-25%~+50%范围内。或者（当粒度通过表面多孔颗粒调整时），其它柱长（L）和粒度（dp）的柱子可以使用，但理论塔板数N应在规定柱的-25%~+50%范围内。如果调节导致更高的理论塔板数时应注意，这样将产生更小的峰容量，应通过缩小额外柱外峰拓宽的因素调整，例如仪器的管路、检测器的体积、采样速率和进样体积。当专论中未规定粒度时，该比值应采用规定柱的最大粒度计算。

7、Particle size (GC): 如果色谱图的符合系统适用性要求以及粒径范围比相同，粒度大小可以从大变小或从小变大，粒径范围比的定义是最大粒度直径除以最小粒度直径。

8、Flow rate (GC): 流速可以最大在±50%调整。（备注：如果专论中规定了线性速度参数，如果载气系统可以按设置的控制，线性速度可以在 +50%~ −25%范围内调整）

9、Flow rate (HPLC)：当粒度改变时，流速也许需要调整，因为为达到相同的性能，小粒度的柱子需要更高的线速度（测量通过较少塔板高度），流速、柱内径、粒度通过下面公式换算。

F2=F1×[(dc22×dp1)/(dc12×dp2)]

其中：

对于等度洗脱，如果粒度从≥3μm变化到＜3μm时，将增加线速度（通过调整流速），如果柱效不下跌20%以上，相同地，如果粒度从＜3μm变化到≥3μm时，应减少线速度（流速）来避免柱效降低20%以上。梯度洗脱：流速、柱内径、粒度将不允许调整。另外，流速可以在±50%调整。（只适用于等度洗脱）

三、欧洲药典9 规定

EP 2.2.46 ChromatographicSeparation Techniques 规定如下：

1、液相色谱-等度洗脱

（1）Composition of themobile phase：小组分的数量可以在相对±30%或绝对±2%范围内调节，两者取其大。（例如：流动相中次组分占10%，按相对±30%它的可调范围在7%~13%，按绝对±2%它的可调范围在8%~12%，取较大者7%~13%；再例如：次组分为5%时，按相对±30%它的可调范围在3.5%~6.5%，按绝对±2%它的可调范围在3%~7%，取较大者3%~7%），但须确保组分的绝对调节量不得超过10%。

（2）pH of the aqueouscomponent of the mobile phase：除非专论中另有规定，用于配制流动相的pH可以在规定的值或范围的±0.2以内调节。如果待测品为非电离物质（中性物质），pH可在±1.0范围内调节。

（3）Concentration ofsalts in the buffer component of a mobile phase：用于配制流动相的含水缓冲液的盐的浓度可在±10%范围内调节。

（4）Flow rate：一般调节范围为±50%，若柱尺寸改变了，流速可以更大范围内调节，具体可按下述公式来计算。

（5）Column parameters：

Stationary phase：固定相的属性不能改变（例如：不能用C8来代替C18）；

particle size：最多可减小50%，不允许增加。

Column dimensions:长度可以±70%范围内调节，内径可在±25%范围内调节。当柱的尺寸改变时，流速通过下面公式进行调节。

F2=F1×[(dc22×dp1)/(dc12×dp2)]

其中：

（6）Temperature：当专论中规定了柱温时，可以±10℃范围内调节，除非另有规定。

（7）Detector wavelength：不允许改变。

（8）Injection volume：若待检峰的灵敏度和重复性好的话可以减小，不允许提高。

2、液相色谱-梯度洗脱

梯度洗脱的液相条件调节需比等度洗脱的更加慎重。流动相的组成/梯度洗脱可以在符合下述条件的前提下进行小范围的调节：

满足系统适应性的条件；

主峰的出峰时间在原定保留时间的±15%以内；

流动相中最终组分的洗脱能力的强度不得弱于原规定组分；

如果系统适应性的条件达不到，则通常首选考虑滞留体积或更换柱子。

（1）Dwell volume滞留体积（死体积）：仪器的结构将会大大的改变分离度、保留时间、相对保留时间，如果这些发生，是由于滞留体积过多。专论中通常在梯度洗脱时先进行等度洗脱。考虑到方法开发系统和实际系统的滞留体积的不同，所以梯度洗脱的时间应该足够。所以使用者在进行方法确认时应确认等度洗脱的时间。如果洗脱时的滞留体积在专论中有规定，则开始洗脱的时间点（t min）应该被调节时间点(tc min)替代。用下面公式计算

式中：

D：滞留体积，ml；

D0：方法开发时的滞留体积，ml；

F：流速 ml/min。

如果方法的验证没有包括该步骤，用于上述目的的等度的描述可以被省略。

（2）pH of the aqueouscomponent of the mobile phase含水相的流动相pH：不允许调节。

（3）Concentration of salts in the buffer component of a mobile phase流动相中缓冲液盐的浓度：不允许调节。

（4）Flow rate流速：当柱子的内径改变时，调节是可以接受的，具体见流速公式。

（5）Column parameters柱参数

Stationary phase固定相：固定相的属性不能改变（例如：不能用C8来代替C18）；

particle size粒径，不允许调节。

Column dimensions柱尺寸：长度可以±70%范围内调节，内径可在±25%范围内调节。当柱的尺寸改变时，流速按照下面的公式进行计算并调节。